【生化诊断原料酶】肌氨酸氧化酶

肌氨酸氧化酶（Sarcosine oxidase）

Sarcosine+O2+H2O⇉

Glycine+HCHO+H2O2

酶学性质

最适pH

37℃,buffer solution:pH 6.0-7.5,Na-phosphate;

pH7.5-9.0,Tris-HCl;pH 9.0-10,Glycine-NaOH.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

最适温度

5 min-reatcion in Tris-HCl buffer pH 8.0.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

pH稳定性

37℃,60 min-treatment with 100 mM

buffer solution:

pH 5.0-6.0,Acetate;pH 6.0-7.5,Na-phosphate;

pH7.5-9.0,Tris-HCl;pH 9.0-10,Glycine-NaOH.

热稳定性

10 min-treatment with 100 mM

K-phosphate buffer,pH 7.5.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

稳定性（-20℃保存）

活性测定方法

原理：肌氨酸氧化酶催化Sarcosine生成H2O2，辣根过氧化物酶催化H2O2与2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠（TOOS）和4-氨基吡啶（4-AA）反应，生成紫色可溶化合物醌亚胺。检测反应液555 nm处吸光度值变化，测定产物生成量。

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化Sarcosine生成1微摩尔H2O2所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.2 M Tris‒HCl缓冲液(pH 8.0)，0.05 ml

1.0 M Sarcosine底物溶液，0.10 ml

100 U/ml辣根过氧化物酶溶液，0.025 ml

15 mM 4‒AA溶液，0.05 ml

15 mM TOOS溶液，0.05 ml

去离子水，0.225 ml。

试剂II：反应终止液，无水乙醇。

试剂III：酶液，使用10 mM磷酸钾缓冲液(pH 7.5)进行稀释。

操作步骤

取0.5 ml试剂I 37℃预热5 min，加入试剂III 0.01 mL，混匀，37℃下反应5 min后，加入2.5 mL试剂II终止反应。使用紫外分光光度计测定反应液在555 nm处吸光度值。

向反应液中加入0.01 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替试剂III），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照。

主要用途：用于临床研究中肌酐酶法检测