这个系列HCD试剂盒有多厉害？

来源：瀚海生物市场中心时间：2024-09-05 作者：瀚海新酶浏览量：390

宿主细胞DNA的来源

宿主细胞是生物制品的重要基础，许多生物制品如传统疫苗、重组蛋白、抗体药物、细胞治疗、基因治疗、mRNA 相关等，通常以中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)、非洲绿猴肾细胞 (Vero)、人胚肾细胞 (HEK 293)、大肠杆菌 (E.coli)、酵母等作为载体进行表达生产。

表达产物在下游纯化的过程中，宿主细胞 DNA (Host Cell DNA，HCD) 通过阴离子交换层析被去除，虽然下游纯化工艺可以去除 HCD 等残留杂质成分，但仍然可能会有部分 HCD 残留，这些残留的外源 DNA 容易引发潜在的免疫原性及安全问题，所以 HCD 检测是生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。

HCD检测的重要性

宿主细胞残留 DNA 进入体内后容易造成多种后果：

● 致癌性：容易引入显性致癌基因，使得部分细胞分化为瘤性细胞。同时残留的宿主细胞核酸可能会在体内造成细胞增殖失控，变为肿瘤细胞，例如 Ad5E1A、SV40。

● 感染性：宿主细胞 DNA 中可能存在感染性病毒基因，通过复制和转录扩增并产生感染性病毒粒子，例如 HIV-1。

● 增加免疫源性：宿主细胞基因组 DNA 富含 CpG，可能通过 TLR(Toll-like receptors) 介导引发免疫反应。

● 潜在重组风险：宿主细胞基因组内的 LTR 可转移到细胞原癌基因邻近处，使这些原癌基因在 LTR 作用下被激活，将正常细胞转化为癌细胞。

HCD的检测方法

《中国药典》2020 年版，通则 3407 针对外源性 DNA 残留量测定收录了 3 种方法：DNA 探针杂交法、荧光染色法、定量 PCR 法。

DNA探针杂交法

将供试品中的外源性 DNA 加热变性为单链后吸附于固相膜上，与特异性标记的单链 DNA 杂交复性结合为双链 DNA。与已知含量的阳性 DNA 对照比对后，显色深度反应 DNA 量，可测定供试品中外源性 DNA 残留量。

方法特点：

• 当样品 DNA 含量小于 10pg 时，样品中化学物质对检测结果影响很大。

• 检测结果不稳定，与真实宿主细胞残留 DNA 含量有很大差异性，检测时间相对较长。

荧光染色法

应用双链 DNA 荧光染料与双链 DNA 结合形成复合物，在 480nm 波长激发下产生荧光信号，使用酶标仪在波长 520nm 处进行检测，在一定的 DNA 浓度范围内，荧光强度与 DNA 浓度成正比。根据标准品和供试品的荧光强度，计算供试品中的 DNA 残留量。

方法特点：

• 荧光信号容易受到干扰，导致特异性变差。

• 必须避免实验耗材和环境的 DNase 污染。

定量PCR法

针对宿主细胞 DNA 设计特异性引物和带有荧光标记的探针，反应开始后宿主细胞 DNA 经热变性解链成单链，探针优先跟模板链退火，引物随后退火到模板上进行链的延伸，延伸过程中扩增酶发挥 5’-3’ 外切酶活性，遇到探针会从 5’ 端逐个碱基切除探针，荧光基团会和淬灭基团分开形成游离的荧光信号，被荧光检测系统检测。采用已知浓度的 DNA 标准品，构建标准曲线，测定供试品中外源 DNA 残留量。

定量 PCR 法是中国药典确认的外源性 DNA 残留测定方法，也是新版 USP 中唯一推荐生物制品中宿主残留 DNA 的检测标准方法。

方法特点：

• 引物和探针特异性的结合目标区域，保证检测结果的准确性和特异性。

• 荧光探针具有更高的灵敏度，针对痕量残留 DNA 进行检测并准确定量。

宿主细胞残留DNA标准

产品特点

瀚海新酶全新升级宿主残留 DNA 检测产品，覆盖 CHO、E.coli、Vero、HEK293、毕赤酵母、支原体等多个细胞类型。试剂盒引物探针序列出自药典，无需做整套验证实验仅需方法确认即可。根据定量PCR 方法开发，LOD 可达 0.003 pg/μL，与其他 DNA 无交叉反应，减少检测反应的假阳性。严格的生产管理体系，批间差可控 CV＜10%。提供手动提取和自动化仪器提取的整套解决方案，2h 内快速完成检测，并保证定量检测的准确性。