精准再升级，抗羟新突破！肌酐检测试剂盒的全面革新

目前，全球约有 8.5 亿人患有肾脏疾病，我国慢性肾病患者率高达 8.2%，相当于每十个人中就有一个肾脏病人。慢性肾病成为威胁人类健康的主要疾病之一。

肌酐是肌肉在人体内代谢的产物，主要分为外源性和内源性肌酐，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物，内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。正常情况下，肌酐几乎全部经过肾小球滤过排出体外^[1]，当肾脏功能受损时，肌酐的排泄会受阻，导致血液中肌酐水平升高，因此，血肌酐水平是肾功能评估和肾损伤筛查的重要指标。

目前临床检测肌酐多以苦味酸法和酶法肌酐为主，与苦味酸法相比，酶法肌酐检测具有抗干扰性强，特异性强，准确度高，线性范围宽等优势^[2,3]。

酶法肌酐检测主要包括肌氨酸氧化酶法与肌氨亚胺水解酶法。肌氨亚胺水解酶法是通过肌酐亚氨基水解酶将肌酐水解，经一系列反应生成谷氨酸，通过测定 340nm 处的吸光度降低速率计算肌酐水平。

肌氨酸氧化酶法的原理是在肌酐酶的催化作用下，体内的肌酐水解生成肌酸，随后肌酸在肌酸酶的催化下水解产生肌氨酸和尿素。肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化成甘氨酸、甲醛和过氧化氢，最后偶联 Trinder 反应形成的醌亚胺色素与肌酐的浓度成正比，通过比色法测定肌酐水平。与肌氨酸氧化酶法相比，肌氨亚氨水解酶法对羟苯磺酸钙、酚磺乙胺等还原性药物具有良好的抗性^[4]，但其试剂的稳定性，线性较差，且受困于原料的供应^[5]，因此，肌氨酸氧化酶法仍是市场肌酐主流检测方法。

肌氨酸氧化酶法肌酐是有多种关键酶涉及组成的多酶级联体系，这一体系的复杂性给试剂的准确度、稳定性及防腐性能的开发与优化提出了更多的难度和挑战。此外，随着集采政策的实施，医疗机构对成本效益的关注日益增加，进一步加剧了检测试剂生产企业在成本控制和效率提升方面的压力。

瀚海新酶深耕酶原料研发，坚持自主创新研发，从酶原料核心出发，兼具核心酶原料以及配方工艺的双重升级优化，全方位提升肌酐试剂的性能，确保检测结果的准确性和可靠性。

焕新首发，性能升级

以点带面，肌酸酶及过氧化氢酶升级引领试剂稳定性提升
肌酸脒基水解酶（Creatinase, CR) 是肌酐酶促检测体系中的关键酶之一，是整个体系的限速酶，对于肌酐检测试剂的准确度、稳定性等性能起着至关重要的作用。

在酶分子的定向进化过程中，上位效应和庞大的迭代饱和突变序列空间极大的增加了肌酸酶的优化难度。瀚海新酶依托酶的定向改造以及高通量筛选平台，基于 9600 万个适合宿主细菌菌株最适生长温度的蛋白质综合序列集进行预训练，筛选出兼具热稳定性以及酶活性的肌酸酶突变体 13M4，研究发现突变体 13M4 的 Tm 值提升约 10 °C (9.35-10.19 °C) ，在 58 ℃ 半衰期提升 655.91 倍。

图1 不同肌酸酶突变体Tm值提升水平

在肌酐检测试剂盒开发中，会通过添加过氧化氢酶（catalase）来消除人体内源性肌酸干扰，但是 catalase 酶的稳定性较差也会导致试剂的临床测值升高。基于此，瀚海新酶从 catalase 酶结构突破结合纯化工艺升级。升级后的 catalase酶，其 70℃ 的半衰期是进口品牌的 20 倍，37℃ 加速 7 天后，catalase 酶活残余活力仍超过 90% 以上。

Catalase 的升级，在提升试剂抗肌酸干扰性能同时，能够赋能肌酐试剂在热加速 14 天，残留酶活依然可以消除内源性肌酸干扰，且不影响样本测值。

在原料酶持续进化的基础上，瀚海新酶通过优化试剂工艺，实现了对肌酐检测试剂热稳定性，冻融稳定性以及开瓶稳定性的全方位优化。

图2 37℃加速14天不同水平质控监测（以0天定标曲线）

图3 在机开瓶30天不同水平质控监测（以0天定标曲线）

图4 37℃加速14天及-20℃冷冻6天冻融3次前后样本测值偏差

以准为核，兼顾试剂准确度与正确度的双重精进

瀚海肌酐检测试剂盒与国外进口 T 厂家临床样本检测比较，平均偏差＜5%，相关系数 r＞0.999，具有较好的相关性。

图5 瀚海试剂与国外T厂家试剂临床样本测值相关性

通过对中检院肌酐冰冻人血清国家标准品，美国冷冻人血清标准品 NIST-SRM909C 样本检测，其测值与靶值偏差＜3%，表明瀚海肌酐检测试剂盒具有高水平的正确度。

线性范围广，血尿同测拓宽试剂临床适用性

瀚海肌酐检测试剂盒线性范围为 10~8840 μmol/L，宽泛的线性检测范围，在适应血浆和尿液多种样本的同时，还能减少样本稀释的繁琐步骤，提高试剂检测效率和准确性。

抗羟革新，以技术突破提升试剂抗干扰新境界
早在 1986 年，就有研究发现羟苯磺酸钙对酶法测定肌酐有干扰^[6]。2014-2015 年，北京协和医院生化免疫研究团队通过体外添加、志愿者口服等试验进一步证实，羟苯磺酸钙对于肌酐（肌氨酸氧化酶法）检测的负干扰普遍存在于国内外主流检测系统，且结果负偏离可高达 60% 多，尤其对于肾功能较差的患者更为显著^[7]。
瀚海新酶从临床应用需求出发，在试剂中添加抗羟苯磺钙药物干扰（Anti-CaD），与羟苯磺酸钙反应，从而消除其对肌酐试剂干扰。同时通过定向进化，改变肌酐酶的分子结构，增强其对添加物的抵抗能力，在清除羟苯磺酸钙的同时保证试剂其它性能不受影响。

样本中肌酸 ≤20 mg/dL，抗坏血酸 ≤50 mg/dL，游离胆红素 ≤40 mg/dL，结合胆红素 ≤20 mg/dL，血红蛋白 ≤100 mg/dL，乳糜 ≤1000 mg/dL 对测定结果的影响可忽略。

当样本中羟苯磺酸钙浓度 ≤20 mg/L，酚磺乙胺浓度 ≤35 mg/L 时，瀚海肌酐不受干扰。

瀚海新酶专注于打造肌酐试剂的全方位解决方案，覆盖从肌酐核心精选酶原料、个性化 OEM 试剂定制到深度配方工艺合作的完整解决方案，致力于满足您对高品质试剂的严格要求。立即联系我们，共同开启您的个性化肌酐试剂解决方案之旅。

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参考文献

[1]:Andreev E, Koopman M, Arisz L. A rise in plasma creatinine that is not a sign of renal failure: which drugs can be responsible?. J Intern Med. 1999;246(3):247-52.

[2]: Delanaye P, Cavalier E, Pottel H. Serum creatinine: not so simple!. Nephron 2017;136:302–8.

[3]:Peake M, Whiting M. Measurement of serum creatinine–current status and future goals. The Clinical biochemist. Reviews. 2006;27:173–84.

[4]: Tanganelli E, Prencipe L, Bassi D, Cambiaghi S, Murador E. Enzymic assay of creatinine in serum and urine with creatinine iminohydrolase and glutamate dehydrogenase. Clin Chem. 1982 Jul;28(7):1461-

[5]. 戴新华,方向,全灿,等. 血清中肌酐的检测方法及其进展[J]. 分析测试学报,2007,26(5):763-767.

[6]:Guder WG, Hoffmann GE. Multicentre evaluation of enzymatic method for creatinine determination using a sensitive colour reagent.J Clin Chem Clin Biochem. 1986;24:889–902.

[7]:Guo X , Hou L , Cheng X ,et al.Strong Negative Interference by Calcium Dobesilate in Sarcosine Oxidase Assays for Serum Creatinine Involving the Trinder Reaction[J].Medicine, 2015, 94(23):e905.