碱性磷酸酶

主要是两类，酶促化学发光和直接化学发光。酶促一般指一些特定的酶催化相应底物释放光子，如HRP催化鲁米诺，AP催化AMPPD等；直接化学发光指一些本身能产生光子的物质发光，比如在碱性条件下的吖啶酯，异鲁米诺等。

化学发光指生色物质在酶促作用下，化学能以光子的形式释放出来。化学发光根据发光的形式和种类分为辉光型和闪光型发光两种。辉光型化学发光如以AMPPD、CDPS、ECL、Diagoxigein等为基础的发光反应。其发光时间较长且稳定。而以发光蛋白、ATP、荧光素酶等为底物的发光反应则是闪光型发光反应，其发光时间较短。

最常见的是鲁米诺及其衍生物-过氧化氢体系，其次，吖啶脂类如光泽精-过氧化氢体系，二氧杂环丁烷类如AMPPD在碱性知磷酸酶ALP的催化下分解，然后，还有过氧化草酰酯+染料体系，钌联吡啶道+TPA体系等等。除此之外还有版很多，像鲁米诺体系里的氧化剂未必只有过氧化氢，还有高锰酸钾、Br2、甲醛等等。催化剂也可以是过氧化物酶或者过渡金属离子还有就是诸如乙醇蒸汽、异丙醇蒸汽这些，在纳米金属粒子上也是可权以产生催化化学发光的。

CDP-Star是通过dioxetane在碱性磷酸酶的激活作用下以持续的速度发出光信号来进行检测，灵敏度高，发光时间从几分钟开始可以延续数天，所以可多次曝光并对曝光时间进行优化。是目前最快速、最灵敏的化学发光底物，曝光时间只需15-60秒。当在尼龙膜上以1:100稀释在检测缓冲液中时，CDP-Star的光信号可以在15分钟内达到最大并且缓衰减达3天以上。特别适用于检测哺乳动物的单拷贝基因、检测极少量的靶DNA，如制作指纹图谱及法医分。
AMPPD 是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成 AMP-D ，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。

AMPPD 为1，2-二氧环乙烷衍生物，它是一种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点：反应速度快，在很短时间内提供正确可靠的结果。AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成 AMP-D ，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。

碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与AKP6六种同功酶。其中第1、2、6种均来自肝脏，第3种来自骨细胞，第4种产生于胎盘及癌细胞，而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。

但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。应结合临床症状进行分析。

基因工程中，广泛使用的碱性磷酸酶有两种，一种是从大肠杆菌提取的BAP，另一种是从牛小肠提取的CIP。两种碱性磷酸酶均能催化去除DNA、RNA、rNTP和dNTP的5′磷酸基，产生5′羟基末端。两种酶反应均需Zn2+。区别在于BAP耐热，而CIP在70℃加热10分钟或经酚抽则灭活；CIP的特异活性较BAP高出10～20倍。因此，CIP应用更广泛。碱性磷酸酶主要用于：①去除DNA和RNA的5′-磷酸基，然后在T4多聚核苷酸激酶催化下，用［r-32P］ATP进行末端标记，继而进行序列分析；②去除载体DNA5′磷酸基，防止自我环化，降低本底，提高重组DNA检出率。

碱性磷酸酶可以去除dna断裂处的5’端的磷酸基团。5’端的磷酸基团对于dna连接是必须的，用碱性磷酸酶处理切开的载体后，载体不能在dna连接酶的作用下自连，而目的基因片段两端是有5’端的磷酸基团的，可以在dna连接酶的作用下与载体连接。所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体dna自连的作用。

发光剂是指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，根据上述发光特点可将发光剂分为荧光知素、生物发光剂和化学发光剂三种。常用的化学发光剂有以三种，酶促反应的发光底物的发光剂，直接化学发光剂，电道化学发光剂。发光剂是回指在发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，根据上述发光特点可将发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂三种。常用的化学发光剂有以答三种，酶促反应的发光底物的发光剂，直接化学发光剂，电化学发光剂。